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如何设置qPCR实验的关键参数——荧光阈值线?
发布时间：2023/11/17
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荧光阈值线(threshold)是与扩增曲线相交的一条水平线，用于确定荧光信号的阈值。阈值线的设置对于荧光定量PCR实验非常重要，它的作用是确定目标信号的有效范围，以获得准确的结果。
阈值线不能设置得太低，否则会受到噪音信号的干扰。另一方面，如果阈值线设置得太高，超过扩增曲线的线性期或平台期，那么得到的数据将不准确。最佳的阈值线位置应该是在扩增曲线接近线性和线与线之间相互平行的位置。通常情况下，最好将阈值线设置在样本重复性最好的区域，通常在指数扩增期的中期或后期。所以，荧光阈值线的设定一般在 PCR 扩增的指数期，为PCR反应前3-15个循环的荧光信号标准差的10倍。
在耶拿qPCRsoft4.1荧光定量PCR软件中，默认情况下会自动为每种分析设置阈值线。当您点击自动阈值线按钮时，软件会自动为您的实验设置最佳阈值线。当然，如果您需要更精细的控制，也可以将阈值线设置为手动模式，然后用鼠标进行上下调整。
需要注意的是，阈值线的调整会影响Ct值的计算。但是只要将阈值线设定在合适的范围内，任何两个样品之间的相对Ct值或△Ct值都会保持不变。因此，可以根据相对Ct值或△Ct值计算不同样本之间的基因表达量的倍数变化，或者使用标准曲线进行绝对定量分析。
总之，阈值线是荧光定量PCR实验中非常重要的一个参数。通过精确地设置阈值线，我们可以获得更准确、更可靠的实验结果。
德国耶拿 qTOWER3 系列荧光定量PCR仪，具有超高的升降温速率、温度精确度和均一性，其 qPCRsoft4.1 荧光定量PCR软件支持中文界面，支持自动和手动设定阈值线，特有的线性温度梯度，可帮助科研人员精准摸索合适的退火温度，从而极大减少DNA扩增过程中非特异性扩增的产生，提高PCR的特异性和保真度。
灵敏度高
新型的光电倍增管检测器，能有效检测弱荧光信号，提高检测灵敏度。
特异性好
最大升温速率：8℃/s，平均升温7 ℃/s，最大降温速率 6℃/s，更短的时间完成PCR过程，提高工作效率，且提高产物特异性。
重复性好
独特光路设计，精准的温控性能（温度精确度：±0.1℃，温度均一性：±0.15℃），保证检测结果的准确性和稳定性。
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方便操作人员使用，并提供中文数据报告。
运行静音
提供安静舒适的工作环境。
检测通道配置灵活
单通道配置在满足基因表达分析实验需求同时具有较高性价比。
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